培养条件：在进行细胞培养时，使用的培养气相为95%空气和5%二氧化碳，温度设定为37℃。本实验所用的细胞株为人黑色素瘤细胞株A375（STR），来源于一位54岁女性黑色素瘤患者的淋巴结转移灶。A375细胞株呈现出上皮样形态，能够在体外以贴壁生长的方式繁殖。该细胞株广泛应用于黑色素瘤的基础研究，包括肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移机制的探讨，以及抗黑色素瘤药物的研发和筛选等方面。

传代方法：根据细胞的生长状态，优化传代比例以保持细胞的活力。建议首次传代的比例为1:2，后续可调整为1:2至1:5。每两天进行一次培养基的更换，以确保细胞的健康生长。

细胞处理：收到细胞后，应立即核对培养瓶上的细胞名称，确认是否与订单一致，并检查瓶身是否有破损或漏液现象。若无异常，使用显微镜观察细胞生长情况，并建议拍摄细胞在40x, 100x, 200x等不同倍率的照片，以备售后参考，前三天的记录尤为重要。细胞培养至良好状态后，添加完全培养液并封闭瓶口，这样可以确保运输过程中的细胞安全。

传代步骤：贴壁细胞传代的具体步骤为：首先去除培养基，并用无钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次；接着，添加0.25%的胰蛋白酶消化液约1-2毫升，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，待细胞大部分变圆并脱落后，迅速添加完全培养基终止消化。然后轻轻吹打细胞，使其完全脱落，并将悬液转移至离心管中进行离心，最终以适当比例分瓶传代。

细胞冻存与复苏：细胞达到80%融合度时，使用PBS清洗后，加胰蛋白酶消化，随后将细胞沉淀与无血清冻存液混合，分装至冻存管，放入-80℃冰箱保存。如后期需转入液氮罐，应先在-80℃中保存24小时以上。在复苏时，将冻存管置于37℃水浴中解冻，再加入完全培养基并离心处理，以确保细胞活力。

注意事项：在运输过程中，细胞的贴壁性可能会影响细胞的存活率，因此如果观察到细胞脱落的现象属于正常情况。如有大量细胞脱落，可考虑重新处理后进行传代。同时，遵循严格的操作规程，不正确的处理方式可能导致细胞污染和存活率下降。

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