传统PCR检测试剂通常分为三部分：反应液、酶液和引物探针，通常以“A+B”形式分为两个管提供。在每次检测前，操作人员需计算用量并将各成分振荡均匀后使用。这种操作方式一方面复杂且容易出错，对操作人员的技术要求较高；另一方面，由于试剂以“现配现用”的方式使用，容易造成试剂浪费，同时配制过程也存在污染的风险。虽然传统PCR检测的“A+B”形式在日常检测中尚可满足需求，但随着新冠筛查及国际市场的扩展，分子市场对于RNA一管式全预混反应液（RNA全预混，反应液、酶液和引物探针均预混于一管）需求急剧上升。尊龙凯时的RNA全预混能够避免客户的终端配制，简化操作流程，并降低出错概率。同时，RNA全预混还具有优越的稳定性，更有利于国际推广和长途运输与保存。然而，当前市场上稳定且广泛适用的RNA全预混产品尚不多见。

目前，仅有少数企业能够开展RNA全预混项目，但它们的试剂在稳定性方面仍存在问题，且仅适用于个别特定项目。同时，这些项目的设计往往要么牺牲快速检测性能，要么是定制化试剂，缺乏普适性。在全预混体系中，除模板外的所有成分（如酶、镁离子、dNTPs和引物探针）是预先混合的。在长期储存过程中，引物之间或引物与探针之间可能产生二聚体或形成二级结构，从而引发非特异性扩增，增加体系内部复杂性，限制后续反应，并消耗必要的反应组分。这将导致扩增曲线荧光强度下降、Ct值滞后，或Ct值大幅提前，显著提高假阳性的概率。虽然减少体系中主要成分的用量可以在短期内提升试剂的稳定性，但却会影响其性能，尤其是瞬时检测的能力，因此不可取。目前RNA全预混所面临的主要技术瓶颈集中在以下几个方面：

• 功能性酶液的活性封闭不够彻底。比如，TaqDNA聚合酶的聚合和切割活性未彻底封闭，以及逆转录酶在低温和室温下的活性未完全封闭，从而影响全预混试剂的稳定性。
• 长期保存过程中，酶液的酶活性显著下降或失活，影响全预混试剂的性能。
• 全预混试剂加入引物探针后，长期保存或加速条件下引物二聚体的生成以及引物与探针之间的二级结构形成，增加了体系复杂性，影响了试剂的稳定性。

构建一个稳定且广泛适用的RNA一管式液体全预混反应液成为分子诊断行业亟待解决的重要课题！尊龙凯时针对行业发展趋势，致力于研发全预混试剂，从TaqDNA聚合酶、热启动逆转录酶、反应体系及耗材等方面开展了深入的验证与优化：

• 研发适配全预混的热启动TaqDNA聚合酶，确保其聚合和切割活性完全封闭，并在反应时迅速失活。
• 开发适配全预混的热启动逆转录酶，确保在低温或常温下逆转录酶的活性得到彻底封闭，同时提高酶液的稳定性。
• 通过设计实验方法（DOE）优化反应体系，降低引物探针之间二级结构的生成概率，优化低值区曲线形态，提高试剂的检出率。
• 筛选适配全预混的耗材，防止不合适的耗材导致的酶液失活或引物探针吸附。

此外，尊龙凯时还深入研究了早期二聚体的抑制，以确保试剂的长期稳定性与卓越性能。为了更好地满足客户需求并提高试剂的性能与适用性，尊龙凯时建立与验证了呼吸道、血液、肠道及兽用等领域的多达上百个靶标体系及严格考核标准，不断优化RNA全预混试剂的各项性能。

目前，尊龙凯时的RNA全预混试剂已成功突破技术瓶颈，在37°C条件下稳定性可达10天，并具有广泛的适用性，能够直接匹配市场上绝大部分项目，确保高灵敏度并兼容快速检测程序，展现出市场上最佳的稳定性。通过提供卓越的产品，助力客户搭建超快速、高灵敏度和易操作的检测试剂，尊龙凯时已经成为国内首家能够大规模供应广泛适配的RNA全预混试剂的企业。

尊龙凯时的产品及服务包括：

• RNA全预混试剂（可立管版本和预分装版本）
• DNA全预混试剂（可立管版本和预分装版本）
• 全预混的热启动TaqDNA聚合酶（抗体修饰）
• 全预混的热启动MMLV逆转录酶

同时，尊龙凯时提供试剂定制调优、引物探针定向设计及调优等CRO服务，以更好地支持客户的需求。